عدد التعديلات للمستخدم (user_editcount) | 103 |
اسم حساب المستخدم (user_name) | 'روبيريوس' |
وقت تأكيد عنوان البريد الإلكتروني (user_emailconfirm) | null |
عمر حساب المستخدم (user_age) | 109244833 |
المجموعات (متضمنة غير المباشرة) التي المستخدم فيها (user_groups) | [
0 => '*',
1 => 'user',
2 => 'autoconfirmed'
] |
الصلاحيات التي يمتلكها المستخدم (user_rights) | [
0 => 'patrolmarks',
1 => 'createaccount',
2 => 'read',
3 => 'edit',
4 => 'createpage',
5 => 'createtalk',
6 => 'writeapi',
7 => 'viewmyprivateinfo',
8 => 'editmyprivateinfo',
9 => 'editmyoptions',
10 => 'abusefilter-log-detail',
11 => 'urlshortener-create-url',
12 => 'centralauth-merge',
13 => 'abusefilter-view',
14 => 'abusefilter-log',
15 => 'vipsscaler-test',
16 => 'flow-hide',
17 => 'flow-edit-title',
18 => 'move-rootuserpages',
19 => 'move-categorypages',
20 => 'minoredit',
21 => 'editmyusercss',
22 => 'editmyuserjson',
23 => 'editmyuserjs',
24 => 'sendemail',
25 => 'applychangetags',
26 => 'changetags',
27 => 'viewmywatchlist',
28 => 'editmywatchlist',
29 => 'spamblacklistlog',
30 => 'flow-lock',
31 => 'mwoauthmanagemygrants',
32 => 'move',
33 => 'collectionsaveasuserpage',
34 => 'collectionsaveascommunitypage',
35 => 'autoconfirmed',
36 => 'editsemiprotected',
37 => 'skipcaptcha',
38 => 'flow-edit-post',
39 => 'ipinfo',
40 => 'ipinfo-view-basic',
41 => 'transcode-reset',
42 => 'transcode-status',
43 => 'movestable'
] |
ما إذا كان المستخدم يعدل من تطبيق المحمول (user_app) | false |
ما إذا كان المستخدم يعدل عبر واجهة المحمول (user_mobile) | true |
المجموعات العالميَّة التي يمتلكها الحساب (global_user_groups) | [] |
عدد تعديلات المستخدم عالميًا (global_user_editcount) | 119 |
هوية الصفحة (page_id) | 9482610 |
نطاق الصفحة (page_namespace) | 0 |
عنوان الصفحة (بدون نطاق) (page_title) | 'تخليق الأوليغونوكليوتايد' |
عنوان الصفحة الكامل (page_prefixedtitle) | 'تخليق الأوليغونوكليوتايد' |
آخر عشرة مساهمين في الصفحة (page_recent_contributors) | [
0 => 'Mr.Ibrahembot',
1 => 'روبيريوس'
] |
عمر الصفحة (بالثواني) (page_age) | 11660 |
أول مستخدم ساهم في الصفحة (page_first_contributor) | 'روبيريوس' |
فعل (action) | 'edit' |
ملخص التعديل/السبب (summary) | 'اضافة قسم التاريخ' |
نموذج المحتوى القديم (old_content_model) | 'wikitext' |
نموذج المحتوى الجديد (new_content_model) | 'wikitext' |
نص الويكي القديم للصفحة، قبل التعديل (old_wikitext) | ''''تخليق الأوليغونوكليوتايد''' هو التخليق الكيميائي لأجزاء قصيرة نسبيًا من [[حمض نووي|الأحماض النووية]] ذات التركيب الكيميائي المحدد ( [[تسلسل الحمض النووي|التسلسل]] ). هذه التقنية مفيدة للغاية في الممارسة المعملية الحالية لأنها توفر وصولاً سريعًا وغير مكلف إلى [[قليل النوكليوتيد|أليغنوكليوتيدات]] مصنوعة خصيصًا بالتسلسل المطلوب. في حين أن [[إنزيم|الإنزيمات]] تقوم بتصنيع [[حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين|DNA]] و[[حمض نووي ريبوزي|RNA]] فقط في [[الاتجاهية (علم الأحياء الجزيئي)|اتجاه 5' إلى 3']] ، فإن تخليق الأوليغونوكليوتايد الكيميائي ليس له هذا القيد، على الرغم من أنه يتم في أغلب الأحيان في الاتجاه المعاكس، 3' إلى 5'. حاليًا، يتم تنفيذ العملية كتوليف في الطور الصلب بطريقة الفوسفورميديت وكتل بناء الفوسفورميديت المشتقة من [[نيوكليوسيد|2'-ديوكسينوكليوسيدات]] المحمية ( [[أدينوسين منقوص الأكسجين|dA]] ، [[سيتيدين منقوص الأكسجين|dC]] ، [[غوانوسين منقوص الأكسجين|dG]] ، و [[ثيميدين|T]] )، أو [[نيوكليوسيد|الريبونوكليوسيدات]] ( [[أدينوزين|A]] ، [[سيتيدين|C]] ، [[غوانوزين|G]] ، و [[يوريدين|U]] )، أو كيميائيًا النيوكليوسيدات المعدلة، على سبيل المثال LNA أو [[حمض نووي مجسور|BNA]] .
للحصول على الأوليغونوكليوتايد المطلوب، يتم ربط وحدات البناء بشكل تسلسلي بسلسلة الأوليغونوكليوتايد المتنامية بالترتيب الذي يتطلبه تسلسل المنتج (انظر الدورة التركيبية أدناه). تمت أتمتة العملية بالكامل منذ أواخر السبعينيات. عند الانتهاء من تجميع السلسلة، يتم تحرير المنتج من المرحلة الصلبة إلى المحلول، وإزالة الحماية منه، وتجميعه. يؤدي حدوث التفاعلات الجانبية إلى تحديد الحدود العملية لطول الأوليغونوكليوتايدات الإصطناعية (تصل إلى حوالي 200 من بقايا [[نوكليوتيد|النيوكليوتايدات]] ) لأن عدد الأخطاء يتراكم مع طول الأوليغونوكليوتايدات التي يتم تصنيعها. غالبًا ما يتم عزل المنتجات بواسطة [[استشراب السائل رفيع الإنجاز|تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء]] (HPLC) للحصول على أوليغونوكليوتايدات مرغوبة بدرجة نقاء عالية. عادةً ما تكون الأوليغونوكليوتايدات الأصطناعية عبارة عن جزيئات DNA أو RNA مفردة الجديلة يبلغ طولها حوالي 15-25 قاعدة.
تجد الأوليغونوكليوتايدات مجموعة متنوعة من التطبيقات في البيولوجيا الجزيئية والطب. يتم استخدامها بشكل شائع كأوليغونوكليوتايدات [[اتجاه (بيولوجيا جزيئية)|مضادة للاتجاه]] ، [[حمض نووي ريبوزي متداخل صغير|وحمض نووي ريبي متداخل صغير]] ، [[مشرع (أحياء)|ومبادئ تمهيدية]] [[تسلسل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين|لتسلسل الحمض النووي]] [[تفاعل البوليمراز المتسلسل|وتضخيمه]] ، [[مسبار التهجين|وتحريات]] للكشف عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي التكميلي عبر التهجين الجزيئي، وأدوات لإدخال [[طفرة (أحياء)|الطفرات]] ومواقع التقييد المستهدفة، [[تخليق اصطناعي للجينات|ولتخليق الجينات الاصطناعية]] . أحد التطبيقات الناشئة لتخليق الأوليغونوكليوتايد هو إعادة إنشاء الفيروسات من التسلسل وحده - إما غير ضارة، مثل Phi_X_174 ، أو خطيرة مثل فيروس [[إنفلونزا|الأنفلونزا]] 1917 أو [[فيروس كورونا المرتبط بالمتلازمة التنفسية الحادة الشديدة النوع 2|SARS-CoV-2]] .
== التاريخ ==
شهد تطور تخليق الأوليغونوكليوتايد أربع طرق رئيسية لتشكيل الروابط بين النيوكليوسيديات وتمت مراجعتها في الأدبيات بتفصيل كبير.
=== العمل المبكر وتوليف الفوسفونيت-h ===
[[ملف:Todd_synthesis.png|تصغير|465x465بك|مخطط. 1. ن-الكلوروسكسينيميد; BN=-CH<sub>2</sub>PH]]
في أوائل الخمسينيات من القرن الماضي، كانت مجموعة [[ألكسندر تود]] رائدة في طرق اختبار الفوسفات الهيدروجيني [[فوسفات|والفوسفات]] لتخليق الأوليغونوكليوتايد. تفاعل المركبات '''1''' و '''2''' لتكوين ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية 3 هو اقتران الفوسفونات الهيدروجينية في المحلول بينما تتفاعل المركبات '''4''' و '''5''' لتعطي '''6''' وهو اقتران ثلاثي إستر فوسفوتي (انظر تخليق إستر الفوسفو أدناه).
[[ملف:H-Phosphonate_Cycle.tif|تصغير|465x465بك|المخطط 2. تخليق الأوليغونوكليوتايدات بطريقة H-فوسفات]]
بعد ثلاثين عامًا، ألهم هذا العمل، بشكل مستقل، مجموعتين بحثيتين لتبني كيمياء الفوسفونات الهيدروجينية في تخليق المرحلة الصلبة باستخدام أحاديات نوكليوزيد الفوسفونات الهيدروجينية '''7''' كوحدات بناء وكلوريد البيفالويل، 2،4،6-ثلاثي إيزوبروبيل بنزين سلفونيل كلوريد (TPS). -Cl)، ومركبات أخرى كمنشطات. أدى التنفيذ العملي لطريقة الفوسفونات الهيدروجينية إلى دورة تركيبية قصيرة وبسيطة جدًا تتكون من خطوتين فقط، الإزالة والاقتران (المخطط 2). يتم [[أكسدة واختزال|إجراء أكسدة]] روابط ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية الداخلية في '''8''' إلى روابط فوسفوديستر في '''9''' بمحلول [[يود|اليود]] في [[بيريدين|البيريدين]] المائي في نهاية مجموعة السلسلة بدلاً من أن تكون خطوة في الدورة الاصطناعية. إذا كان مرغوباً، يمكن إجراء الأكسدة تحت الظروف اللامائية. بدلاً من ذلك، يمكن تحويل '''8''' إلى فوسفوروثيوات '''10''' أو فوسفوروسيلينوات '''11''' (X = Se)، أو أكسدته بواسطة [[رباعي كلوريد الكربون|CCl <sub>4</sub>]] في وجود أمينات أولية أو ثانوية إلى نظائر فوسفورميدات '''12.''' . تعتبر هذه الطريقة مريحة للغاية حيث يمكن إدخال أنواع مختلفة من تعديلات الفوسفات (فوسفات/فوسفوروثيوات/فوسفورميدات) إلى نفس الأوليغونوكليوتايد لتعديل خصائصه.
في أغلب الأحيان، تكون وحدات بناء الفوسفونات الهيدروجينية محمية عند مجموعة 5'-هيدروكسي وعند المجموعة الأمينية للقواعد النووية A وC وG بنفس الطريقة التي تتم بها حماية وحدات بناء الفوسفونيت (انظر أدناه). ومع ذلك، فإن الحماية في المجموعة الأمينية ليست إلزامية.
=== تخليق الفوسفوديستر ===
[[ملف:Phosphodiester_method.png|تصغير|300x300بك|مخطط. 3 اقتران الأوليغونوكليوتايد بطريقة فوسفوديستر. Tr = -CPh <sub>3</sub>]]
في الخمسينيات من القرن العشرين، طور [[هار غوبند خورانا]] وزملاؤه طريقة [[رابطة فوسفات ثنائي الأستر|فوسفوديستر]] حيث تم تنشيط 3'- ''O'' -أسيتيل نوكليوسيد-5'- ''O'' -فوسفات '''2''' (المخطط 3) مع ''ن'' ، ن ''{{'}}'' -ثنائي سيكلوهيكسيل كاربوديميد (DCC) أو 4-تولوين سلفونيل. كلوريد (Ts-Cl). عند إزالة مجموعة 3'- ''O'' -الأسيتيل باستخدام التحلل المائي المحفز بالقاعدة، نتج المزيد من استطالة السلسلة. باتباع هذه المنهجية، تم تصنيع مجموعات من النوكليوتيدات ثلاثية ورباعية الأكسجين وتم تحويلها إنزيميًا إلى أوليغونوكليوتايدات أطول، مما سمح بتوضيح [[شيفرة جينية|الشفرة الوراثية]] . يتمثل القيد الرئيسي لطريقة الفوسفوديستر في تكوين أوليجومرات بيروفسفات وأوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات إنترنوكليوسيديك. تبدو هذه الطريقة بمثابة خطوة إلى الوراء من الكيمياء الأكثر انتقائية الموصوفة سابقًا؛ ومع ذلك، في ذلك الوقت، لم تكن معظم مجموعات حماية الفوسفات المتاحة الآن قد تم تقديمها بعد. استلزم الافتقار إلى استراتيجية الحماية الملائمة التراجع إلى كيمياء أبطأ وأقل انتقائية لتحقيق الهدف النهائي للدراسة.
=== تخليق الفوسفوتريستر ===
[[ملف:Phosphotriester_method.png|تصغير|300x300بك|المخطط 4. اقتران قليل النوكليوتيد بطريقة الفوسفوتريستر؛ MMT = -CPh <sub>2</sub> (4 <sub>-</sub> <sub>MeOC6H4</sub> ).]]
في ستينيات القرن العشرين، طورت مجموعات بقيادة آر. ليتسينغر <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. XIII. Synthesis of oligothymidylates via phosphotriester intermediates|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1969|المجلد=91|العدد=12|صفحة=3350|مؤلف2=Ogilvie, K. K.|دوي=10.1021/ja01040a042}}</ref> وسي. ريس <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=The chemical synthesis of oligo- and poly-nucleotides by the phosphotriester approach|صحيفة=Tetrahedron|مؤلف=Reese, C. B.|سنة=1978|المجلد=34|العدد=21|صفحة=3143|دوي=10.1016/0040-4020(78)87013-6}}</ref> طريقة تحليل الفوسفوتستر. كان الاختلاف المحدد عن نهج ثنائي إستر الفوسفود هو حماية شحنة الفوسفات في كتلة البناء '''1''' (المخطط 4) وفي المنتج '''3''' مع مجموعة [[مجموعة حماية|2-سيانو إيثيل]] . هذا يمنع تكوين أوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات بين النووي. سمحت الانتقائية العالية للطريقة باستخدام عوامل اقتران ومحفزات أكثر كفاءة، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Rapid synthesis of long-chain deoxyribooligonucleotides by the N-methylimidazolide phosphotriester method|صحيفة=Nucleic Acids Res.|مؤلف=Efimov, V. A.|سنة=1983|المجلد=11|العدد=23|صفحات=8369–8387|مؤلف2=Buryakova, A. A.|مؤلف3=Reverdatto, S. V.|مؤلف4=Chakhmakhcheva, O. G.|مؤلف5=Ovchinnikov, Yu. A.|ببمد_سنترال=326588|pmid=6324083|دوي=10.1093/nar/11.23.8369}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Approach to the synthesis of natural and modified oligonucleotides by the phosphotriester method using O-nucleophilic intramolecular catalysis|صحيفة=Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids|مؤلف=Efimov, V. A|سنة=2007|المجلد=26|العدد=8–9|صفحات=1087–93|مؤلف2=Molchanova, N. S.|مؤلف3=Chakhmakhcheva, O. G.|s2cid=34548367|pmid=18058542|دوي=10.1080/15257770701516268}}</ref> مما أدى إلى تقليل طول عملية التوليف بشكل كبير. تم أيضًا تطبيق الطريقة، التي تم تطويرها في البداية لتخليق مرحلة المحلول، على البوليسترين "الفشار" منخفض الارتباط، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Stepwise synthesis of oligodeoxyribonucleotides on an insoluble polymer support|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1966|المجلد=88|العدد=22|صفحات=5319–24|مؤلف2=Mahadevan|الأول2=V.|pmid=5979268|دوي=10.1021/ja00974a053}}</ref> وبعد ذلك على الزجاج المسامي المتحكم فيه (CPG، راجع "مواد الدعم الصلبة" أدناه)، مما أدى إلى بدء عملية بحث ضخمة في تخليق المرحلة الصلبة من الأوليغونوكليوتايدات وأدى في النهاية إلى أتمتة تجميع سلسلة أوليغونوكليوتايد.
=== تخليق ترايستر الفوسفيت ===
في السبعينيات، تم استخدام مشتقات النيوكليوسيدات P(III) الأكثر تفاعلية، 3'- ''O-'' كلوروفوسفيت، بنجاح لتكوين روابط بين النيوكليوسيدات. وأدى ذلك إلى اكتشاف منهجية [[إستر الفوسفيت|تريستر الفوسفيت]] . استفادت المجموعة التي يقودها م. كاروثرز من 1 رباعي الفوسفات الهيدروجيني الأقل عدوانية والأكثر انتقائية ونفذت الطريقة على الطور الصلب. وبعد فترة وجيزة جدًا، قام العمال من نفس المجموعة بتحسين الطريقة باستخدام فوسفوراميديت النيوكليوزيد الأكثر استقرارًا كوحدات بناء. أدى استخدام مجموعة 2-سيانو إيثيل الفوسفيت المحمية بدلاً من مجموعة [[مجموعة حماية|ميثيل]] الأقل سهولة في الاستخدام <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. X. An investigation of several deoxynucleoside phosphoramidites useful for synthesizing deoxyoligonucleotides|صحيفة=Tetrahedron Lett.|مؤلف=McBride, L. J.|سنة=1983|المجلد=24|العدد=3|صفحات=245–248|مؤلف2=Caruthers, M. H.|دوي=10.1016/S0040-4039(00)81376-3}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Hindered dialkylamino nucleoside phosphite reagents in the synthesis of two DNA 51-mers|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Adams, S. P.|سنة=1983|المجلد=105|العدد=3|صفحات=661–663|مؤلف2=Kavka, K. S.|مؤلف3=Wykes, E. J.|مؤلف4=Holder, S. B.|مؤلف5=Galluppi, G. R.|دوي=10.1021/ja00341a078}}</ref> إلى ظهور فوسفوراميديت النيوكليوزيد المستخدم حاليًا في تخليق الأوليغونوكليوتايد (انظر وحدات بناء الفوسفوراميديت أدناه). العديد من التحسينات اللاحقة على تصنيع كتل البناء، ومركبات اوليغونوكليوتايدات، والبروتوكولات الاصطناعية جعلت من كيمياء الفوسفوراميديت طريقة موثوقة للغاية ومناسبة للاختيار لتحضير الأوليغونوكليوتايدات الاصطناعية.
== مراجع ==
{{مراجع}}
{{شريط بوابات|الكيمياء}}
[[تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي]]
[[تصنيف:تقنيات مخبرية]]
[[تصنيف:تقنيات وراثية]]' |
نص الويكي الجديد للصفحة، بعد التعديل (new_wikitext) | ''''تخليق الأوليغونوكليوتايد''' هو التخليق الكيميائي لأجزاء قصيرة نسبيًا من [[حمض نووي|الأحماض النووية]] ذات التركيب الكيميائي المحدد ( [[تسلسل الحمض النووي|التسلسل]] ). هذه التقنية مفيدة للغاية في الممارسة المعملية الحالية لأنها توفر وصولاً سريعًا وغير مكلف إلى [[قليل النوكليوتيد|أليغنوكليوتيدات]] مصنوعة خصيصًا بالتسلسل المطلوب. في حين أن [[إنزيم|الإنزيمات]] تقوم بتصنيع [[حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين|DNA]] و[[حمض نووي ريبوزي|RNA]] فقط في [[الاتجاهية (علم الأحياء الجزيئي)|اتجاه 5' إلى 3']] ، فإن تخليق الأوليغونوكليوتايد الكيميائي ليس له هذا القيد، على الرغم من أنه يتم في أغلب الأحيان في الاتجاه المعاكس، 3' إلى 5'. حاليًا، يتم تنفيذ العملية كتوليف في الطور الصلب بطريقة الفوسفورميديت وكتل بناء الفوسفورميديت المشتقة من [[نيوكليوسيد|2'-ديوكسينوكليوسيدات]] المحمية ( [[أدينوسين منقوص الأكسجين|dA]] ، [[سيتيدين منقوص الأكسجين|dC]] ، [[غوانوسين منقوص الأكسجين|dG]] ، و [[ثيميدين|T]] )، أو [[نيوكليوسيد|الريبونوكليوسيدات]] ( [[أدينوزين|A]] ، [[سيتيدين|C]] ، [[غوانوزين|G]] ، و [[يوريدين|U]] )، أو كيميائيًا النيوكليوسيدات المعدلة، على سبيل المثال LNA أو [[حمض نووي مجسور|BNA]] .
للحصول على الأوليغونوكليوتايد المطلوب، يتم ربط وحدات البناء بشكل تسلسلي بسلسلة الأوليغونوكليوتايد المتنامية بالترتيب الذي يتطلبه تسلسل المنتج (انظر الدورة التركيبية أدناه). تمت أتمتة العملية بالكامل منذ أواخر السبعينيات. عند الانتهاء من تجميع السلسلة، يتم تحرير المنتج من المرحلة الصلبة إلى المحلول، وإزالة الحماية منه، وتجميعه. يؤدي حدوث التفاعلات الجانبية إلى تحديد الحدود العملية لطول الأوليغونوكليوتايدات الإصطناعية (تصل إلى حوالي 200 من بقايا [[نوكليوتيد|النيوكليوتايدات]] ) لأن عدد الأخطاء يتراكم مع طول الأوليغونوكليوتايدات التي يتم تصنيعها. غالبًا ما يتم عزل المنتجات بواسطة [[استشراب السائل رفيع الإنجاز|تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء]] (HPLC) للحصول على أوليغونوكليوتايدات مرغوبة بدرجة نقاء عالية. عادةً ما تكون الأوليغونوكليوتايدات الأصطناعية عبارة عن جزيئات DNA أو RNA مفردة الجديلة يبلغ طولها حوالي 15-25 قاعدة.
تجد الأوليغونوكليوتايدات مجموعة متنوعة من التطبيقات في البيولوجيا الجزيئية والطب. يتم استخدامها بشكل شائع كأوليغونوكليوتايدات [[اتجاه (بيولوجيا جزيئية)|مضادة للاتجاه]] ، [[حمض نووي ريبوزي متداخل صغير|وحمض نووي ريبي متداخل صغير]] ، [[مشرع (أحياء)|ومبادئ تمهيدية]] [[تسلسل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين|لتسلسل الحمض النووي]] [[تفاعل البوليمراز المتسلسل|وتضخيمه]] ، [[مسبار التهجين|وتحريات]] للكشف عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي التكميلي عبر التهجين الجزيئي، وأدوات لإدخال [[طفرة (أحياء)|الطفرات]] ومواقع التقييد المستهدفة، [[تخليق اصطناعي للجينات|ولتخليق الجينات الاصطناعية]] . أحد التطبيقات الناشئة لتخليق الأوليغونوكليوتايد هو إعادة إنشاء الفيروسات من التسلسل وحده - إما غير ضارة، مثل Phi_X_174 ، أو خطيرة مثل فيروس [[إنفلونزا|الأنفلونزا]] 1917 أو [[فيروس كورونا المرتبط بالمتلازمة التنفسية الحادة الشديدة النوع 2|SARS-CoV-2]] .
== التاريخ ==
شهد تطور تخليق الأوليغونوكليوتايد أربع طرق رئيسية لتشكيل الروابط بين النيوكليوسيديات وتمت مراجعتها في الأدبيات بتفصيل كبير.
تخليق الفوسفونات H: طورت هذه الطريقة مجموعة ألكسندر تود في أوائل الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفونات H ثنائية الإستر في محلول، تليها أكسدة وإزالة الحماية.
تخليق الفوسفات ثلاثي الإستر: طورت هذه الطريقة أيضًا مجموعة تود في الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفات ثلاثي الإستر، والتي هي أكثر استقرارًا من الفوسفونات H، ولكنها تتطلب ظروفًا أكثر قسوة وحماية أكثر.
تخليق الفوسفيت ثلاثي الإستر: عرضت هذه الطريقة مارفن كاروثرز وزملاؤه في أواخر السبعينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفيت ثلاثي الإستر على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة أسرع وأكثر كفاءة ومرونة من الطرق السابقة، وهي أساس معظم تخليق الأوليغونوكليوتيدات الحديث.
تخليق الفوسفوراميديت: طورت هذه الطريقة ويلي بانوارث وزملاؤه في منتصف الثمانينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفوراميديت، والتي هي أكثر تفاعلاً وأقل سمية من الفوسفيت ثلاثي الإستر، على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة هي الطريقة الأكثر استخدامًا لتخليق الأوليغونوكليوتيدات اليوم، حيث تسمح بإدخال تعديلات وعلامات مختلفة.<ref>{{استشهاد ويب|عنوان=The Chemical Synthesis of Oligonucleotides|مسار=https://www.biosyn.com/tew/the-chemical-synthesis-of-oligonucleotides.aspx|تاريخ الوصول=2024-01-16|صحيفة=www.biosyn.com|مؤلف=https://www.biosyn.com/}}</ref>
== مراجع ==
{{مراجع}}
{{شريط بوابات|الكيمياء}}
[[تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي]]
[[تصنيف:تقنيات مخبرية]]
[[تصنيف:تقنيات وراثية]]' |
فرق موحد للتغييرات المصنوعة بواسطة التعديل (edit_diff) | '@@ -9,22 +9,12 @@
شهد تطور تخليق الأوليغونوكليوتايد أربع طرق رئيسية لتشكيل الروابط بين النيوكليوسيديات وتمت مراجعتها في الأدبيات بتفصيل كبير.
-=== العمل المبكر وتوليف الفوسفونيت-h ===
-[[ملف:Todd_synthesis.png|تصغير|465x465بك|مخطط. 1. ن-الكلوروسكسينيميد; BN=-CH<sub>2</sub>PH]]
-في أوائل الخمسينيات من القرن الماضي، كانت مجموعة [[ألكسندر تود]] رائدة في طرق اختبار الفوسفات الهيدروجيني [[فوسفات|والفوسفات]] لتخليق الأوليغونوكليوتايد. تفاعل المركبات '''1''' و '''2''' لتكوين ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية 3 هو اقتران الفوسفونات الهيدروجينية في المحلول بينما تتفاعل المركبات '''4''' و '''5''' لتعطي '''6''' وهو اقتران ثلاثي إستر فوسفوتي (انظر تخليق إستر الفوسفو أدناه).
-[[ملف:H-Phosphonate_Cycle.tif|تصغير|465x465بك|المخطط 2. تخليق الأوليغونوكليوتايدات بطريقة H-فوسفات]]
-بعد ثلاثين عامًا، ألهم هذا العمل، بشكل مستقل، مجموعتين بحثيتين لتبني كيمياء الفوسفونات الهيدروجينية في تخليق المرحلة الصلبة باستخدام أحاديات نوكليوزيد الفوسفونات الهيدروجينية '''7''' كوحدات بناء وكلوريد البيفالويل، 2،4،6-ثلاثي إيزوبروبيل بنزين سلفونيل كلوريد (TPS). -Cl)، ومركبات أخرى كمنشطات. أدى التنفيذ العملي لطريقة الفوسفونات الهيدروجينية إلى دورة تركيبية قصيرة وبسيطة جدًا تتكون من خطوتين فقط، الإزالة والاقتران (المخطط 2). يتم [[أكسدة واختزال|إجراء أكسدة]] روابط ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية الداخلية في '''8''' إلى روابط فوسفوديستر في '''9''' بمحلول [[يود|اليود]] في [[بيريدين|البيريدين]] المائي في نهاية مجموعة السلسلة بدلاً من أن تكون خطوة في الدورة الاصطناعية. إذا كان مرغوباً، يمكن إجراء الأكسدة تحت الظروف اللامائية. بدلاً من ذلك، يمكن تحويل '''8''' إلى فوسفوروثيوات '''10''' أو فوسفوروسيلينوات '''11''' (X = Se)، أو أكسدته بواسطة [[رباعي كلوريد الكربون|CCl <sub>4</sub>]] في وجود أمينات أولية أو ثانوية إلى نظائر فوسفورميدات '''12.''' . تعتبر هذه الطريقة مريحة للغاية حيث يمكن إدخال أنواع مختلفة من تعديلات الفوسفات (فوسفات/فوسفوروثيوات/فوسفورميدات) إلى نفس الأوليغونوكليوتايد لتعديل خصائصه.
-في أغلب الأحيان، تكون وحدات بناء الفوسفونات الهيدروجينية محمية عند مجموعة 5'-هيدروكسي وعند المجموعة الأمينية للقواعد النووية A وC وG بنفس الطريقة التي تتم بها حماية وحدات بناء الفوسفونيت (انظر أدناه). ومع ذلك، فإن الحماية في المجموعة الأمينية ليست إلزامية.
+تخليق الفوسفونات H: طورت هذه الطريقة مجموعة ألكسندر تود في أوائل الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفونات H ثنائية الإستر في محلول، تليها أكسدة وإزالة الحماية.
-=== تخليق الفوسفوديستر ===
-[[ملف:Phosphodiester_method.png|تصغير|300x300بك|مخطط. 3 اقتران الأوليغونوكليوتايد بطريقة فوسفوديستر. Tr = -CPh <sub>3</sub>]]
-في الخمسينيات من القرن العشرين، طور [[هار غوبند خورانا]] وزملاؤه طريقة [[رابطة فوسفات ثنائي الأستر|فوسفوديستر]] حيث تم تنشيط 3'- ''O'' -أسيتيل نوكليوسيد-5'- ''O'' -فوسفات '''2''' (المخطط 3) مع ''ن'' ، ن ''{{'}}'' -ثنائي سيكلوهيكسيل كاربوديميد (DCC) أو 4-تولوين سلفونيل. كلوريد (Ts-Cl). عند إزالة مجموعة 3'- ''O'' -الأسيتيل باستخدام التحلل المائي المحفز بالقاعدة، نتج المزيد من استطالة السلسلة. باتباع هذه المنهجية، تم تصنيع مجموعات من النوكليوتيدات ثلاثية ورباعية الأكسجين وتم تحويلها إنزيميًا إلى أوليغونوكليوتايدات أطول، مما سمح بتوضيح [[شيفرة جينية|الشفرة الوراثية]] . يتمثل القيد الرئيسي لطريقة الفوسفوديستر في تكوين أوليجومرات بيروفسفات وأوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات إنترنوكليوسيديك. تبدو هذه الطريقة بمثابة خطوة إلى الوراء من الكيمياء الأكثر انتقائية الموصوفة سابقًا؛ ومع ذلك، في ذلك الوقت، لم تكن معظم مجموعات حماية الفوسفات المتاحة الآن قد تم تقديمها بعد. استلزم الافتقار إلى استراتيجية الحماية الملائمة التراجع إلى كيمياء أبطأ وأقل انتقائية لتحقيق الهدف النهائي للدراسة.
+تخليق الفوسفات ثلاثي الإستر: طورت هذه الطريقة أيضًا مجموعة تود في الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفات ثلاثي الإستر، والتي هي أكثر استقرارًا من الفوسفونات H، ولكنها تتطلب ظروفًا أكثر قسوة وحماية أكثر.
-=== تخليق الفوسفوتريستر ===
-[[ملف:Phosphotriester_method.png|تصغير|300x300بك|المخطط 4. اقتران قليل النوكليوتيد بطريقة الفوسفوتريستر؛ MMT = -CPh <sub>2</sub> (4 <sub>-</sub> <sub>MeOC6H4</sub> ).]]
-في ستينيات القرن العشرين، طورت مجموعات بقيادة آر. ليتسينغر <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. XIII. Synthesis of oligothymidylates via phosphotriester intermediates|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1969|المجلد=91|العدد=12|صفحة=3350|مؤلف2=Ogilvie, K. K.|دوي=10.1021/ja01040a042}}</ref> وسي. ريس <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=The chemical synthesis of oligo- and poly-nucleotides by the phosphotriester approach|صحيفة=Tetrahedron|مؤلف=Reese, C. B.|سنة=1978|المجلد=34|العدد=21|صفحة=3143|دوي=10.1016/0040-4020(78)87013-6}}</ref> طريقة تحليل الفوسفوتستر. كان الاختلاف المحدد عن نهج ثنائي إستر الفوسفود هو حماية شحنة الفوسفات في كتلة البناء '''1''' (المخطط 4) وفي المنتج '''3''' مع مجموعة [[مجموعة حماية|2-سيانو إيثيل]] . هذا يمنع تكوين أوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات بين النووي. سمحت الانتقائية العالية للطريقة باستخدام عوامل اقتران ومحفزات أكثر كفاءة، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Rapid synthesis of long-chain deoxyribooligonucleotides by the N-methylimidazolide phosphotriester method|صحيفة=Nucleic Acids Res.|مؤلف=Efimov, V. A.|سنة=1983|المجلد=11|العدد=23|صفحات=8369–8387|مؤلف2=Buryakova, A. A.|مؤلف3=Reverdatto, S. V.|مؤلف4=Chakhmakhcheva, O. G.|مؤلف5=Ovchinnikov, Yu. A.|ببمد_سنترال=326588|pmid=6324083|دوي=10.1093/nar/11.23.8369}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Approach to the synthesis of natural and modified oligonucleotides by the phosphotriester method using O-nucleophilic intramolecular catalysis|صحيفة=Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids|مؤلف=Efimov, V. A|سنة=2007|المجلد=26|العدد=8–9|صفحات=1087–93|مؤلف2=Molchanova, N. S.|مؤلف3=Chakhmakhcheva, O. G.|s2cid=34548367|pmid=18058542|دوي=10.1080/15257770701516268}}</ref> مما أدى إلى تقليل طول عملية التوليف بشكل كبير. تم أيضًا تطبيق الطريقة، التي تم تطويرها في البداية لتخليق مرحلة المحلول، على البوليسترين "الفشار" منخفض الارتباط، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Stepwise synthesis of oligodeoxyribonucleotides on an insoluble polymer support|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1966|المجلد=88|العدد=22|صفحات=5319–24|مؤلف2=Mahadevan|الأول2=V.|pmid=5979268|دوي=10.1021/ja00974a053}}</ref> وبعد ذلك على الزجاج المسامي المتحكم فيه (CPG، راجع "مواد الدعم الصلبة" أدناه)، مما أدى إلى بدء عملية بحث ضخمة في تخليق المرحلة الصلبة من الأوليغونوكليوتايدات وأدى في النهاية إلى أتمتة تجميع سلسلة أوليغونوكليوتايد.
+تخليق الفوسفيت ثلاثي الإستر: عرضت هذه الطريقة مارفن كاروثرز وزملاؤه في أواخر السبعينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفيت ثلاثي الإستر على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة أسرع وأكثر كفاءة ومرونة من الطرق السابقة، وهي أساس معظم تخليق الأوليغونوكليوتيدات الحديث.
-=== تخليق ترايستر الفوسفيت ===
-في السبعينيات، تم استخدام مشتقات النيوكليوسيدات P(III) الأكثر تفاعلية، 3'- ''O-'' كلوروفوسفيت، بنجاح لتكوين روابط بين النيوكليوسيدات. وأدى ذلك إلى اكتشاف منهجية [[إستر الفوسفيت|تريستر الفوسفيت]] . استفادت المجموعة التي يقودها م. كاروثرز من 1 رباعي الفوسفات الهيدروجيني الأقل عدوانية والأكثر انتقائية ونفذت الطريقة على الطور الصلب. وبعد فترة وجيزة جدًا، قام العمال من نفس المجموعة بتحسين الطريقة باستخدام فوسفوراميديت النيوكليوزيد الأكثر استقرارًا كوحدات بناء. أدى استخدام مجموعة 2-سيانو إيثيل الفوسفيت المحمية بدلاً من مجموعة [[مجموعة حماية|ميثيل]] الأقل سهولة في الاستخدام <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. X. An investigation of several deoxynucleoside phosphoramidites useful for synthesizing deoxyoligonucleotides|صحيفة=Tetrahedron Lett.|مؤلف=McBride, L. J.|سنة=1983|المجلد=24|العدد=3|صفحات=245–248|مؤلف2=Caruthers, M. H.|دوي=10.1016/S0040-4039(00)81376-3}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Hindered dialkylamino nucleoside phosphite reagents in the synthesis of two DNA 51-mers|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Adams, S. P.|سنة=1983|المجلد=105|العدد=3|صفحات=661–663|مؤلف2=Kavka, K. S.|مؤلف3=Wykes, E. J.|مؤلف4=Holder, S. B.|مؤلف5=Galluppi, G. R.|دوي=10.1021/ja00341a078}}</ref> إلى ظهور فوسفوراميديت النيوكليوزيد المستخدم حاليًا في تخليق الأوليغونوكليوتايد (انظر وحدات بناء الفوسفوراميديت أدناه). العديد من التحسينات اللاحقة على تصنيع كتل البناء، ومركبات اوليغونوكليوتايدات، والبروتوكولات الاصطناعية جعلت من كيمياء الفوسفوراميديت طريقة موثوقة للغاية ومناسبة للاختيار لتحضير الأوليغونوكليوتايدات الاصطناعية.
+تخليق الفوسفوراميديت: طورت هذه الطريقة ويلي بانوارث وزملاؤه في منتصف الثمانينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفوراميديت، والتي هي أكثر تفاعلاً وأقل سمية من الفوسفيت ثلاثي الإستر، على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة هي الطريقة الأكثر استخدامًا لتخليق الأوليغونوكليوتيدات اليوم، حيث تسمح بإدخال تعديلات وعلامات مختلفة.<ref>{{استشهاد ويب|عنوان=The Chemical Synthesis of Oligonucleotides|مسار=https://www.biosyn.com/tew/the-chemical-synthesis-of-oligonucleotides.aspx|تاريخ الوصول=2024-01-16|صحيفة=www.biosyn.com|مؤلف=https://www.biosyn.com/}}</ref>
== مراجع ==
' |
حجم الصفحة الجديد (new_size) | 7463 |
حجم الصفحة القديم (old_size) | 16804 |
الحجم المتغير في التعديل (edit_delta) | -9341 |
السطور المضافة في التعديل (added_lines) | [
0 => 'تخليق الفوسفونات H: طورت هذه الطريقة مجموعة ألكسندر تود في أوائل الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفونات H ثنائية الإستر في محلول، تليها أكسدة وإزالة الحماية. ',
1 => 'تخليق الفوسفات ثلاثي الإستر: طورت هذه الطريقة أيضًا مجموعة تود في الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفات ثلاثي الإستر، والتي هي أكثر استقرارًا من الفوسفونات H، ولكنها تتطلب ظروفًا أكثر قسوة وحماية أكثر.',
2 => 'تخليق الفوسفيت ثلاثي الإستر: عرضت هذه الطريقة مارفن كاروثرز وزملاؤه في أواخر السبعينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفيت ثلاثي الإستر على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة أسرع وأكثر كفاءة ومرونة من الطرق السابقة، وهي أساس معظم تخليق الأوليغونوكليوتيدات الحديث.',
3 => 'تخليق الفوسفوراميديت: طورت هذه الطريقة ويلي بانوارث وزملاؤه في منتصف الثمانينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفوراميديت، والتي هي أكثر تفاعلاً وأقل سمية من الفوسفيت ثلاثي الإستر، على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة هي الطريقة الأكثر استخدامًا لتخليق الأوليغونوكليوتيدات اليوم، حيث تسمح بإدخال تعديلات وعلامات مختلفة.<ref>{{استشهاد ويب|عنوان=The Chemical Synthesis of Oligonucleotides|مسار=https://www.biosyn.com/tew/the-chemical-synthesis-of-oligonucleotides.aspx|تاريخ الوصول=2024-01-16|صحيفة=www.biosyn.com|مؤلف=https://www.biosyn.com/}}</ref>'
] |
السطور المزالة في التعديل (removed_lines) | [
0 => '=== العمل المبكر وتوليف الفوسفونيت-h ===',
1 => '[[ملف:Todd_synthesis.png|تصغير|465x465بك|مخطط. 1. ن-الكلوروسكسينيميد; BN=-CH<sub>2</sub>PH]]',
2 => 'في أوائل الخمسينيات من القرن الماضي، كانت مجموعة [[ألكسندر تود]] رائدة في طرق اختبار الفوسفات الهيدروجيني [[فوسفات|والفوسفات]] لتخليق الأوليغونوكليوتايد. تفاعل المركبات '''1''' و '''2''' لتكوين ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية 3 هو اقتران الفوسفونات الهيدروجينية في المحلول بينما تتفاعل المركبات '''4''' و '''5''' لتعطي '''6''' وهو اقتران ثلاثي إستر فوسفوتي (انظر تخليق إستر الفوسفو أدناه).',
3 => '[[ملف:H-Phosphonate_Cycle.tif|تصغير|465x465بك|المخطط 2. تخليق الأوليغونوكليوتايدات بطريقة H-فوسفات]]',
4 => 'بعد ثلاثين عامًا، ألهم هذا العمل، بشكل مستقل، مجموعتين بحثيتين لتبني كيمياء الفوسفونات الهيدروجينية في تخليق المرحلة الصلبة باستخدام أحاديات نوكليوزيد الفوسفونات الهيدروجينية '''7''' كوحدات بناء وكلوريد البيفالويل، 2،4،6-ثلاثي إيزوبروبيل بنزين سلفونيل كلوريد (TPS). -Cl)، ومركبات أخرى كمنشطات. أدى التنفيذ العملي لطريقة الفوسفونات الهيدروجينية إلى دورة تركيبية قصيرة وبسيطة جدًا تتكون من خطوتين فقط، الإزالة والاقتران (المخطط 2). يتم [[أكسدة واختزال|إجراء أكسدة]] روابط ثنائي إستر الفوسفونات الهيدروجينية الداخلية في '''8''' إلى روابط فوسفوديستر في '''9''' بمحلول [[يود|اليود]] في [[بيريدين|البيريدين]] المائي في نهاية مجموعة السلسلة بدلاً من أن تكون خطوة في الدورة الاصطناعية. إذا كان مرغوباً، يمكن إجراء الأكسدة تحت الظروف اللامائية. بدلاً من ذلك، يمكن تحويل '''8''' إلى فوسفوروثيوات '''10''' أو فوسفوروسيلينوات '''11''' (X = Se)، أو أكسدته بواسطة [[رباعي كلوريد الكربون|CCl <sub>4</sub>]] في وجود أمينات أولية أو ثانوية إلى نظائر فوسفورميدات '''12.''' . تعتبر هذه الطريقة مريحة للغاية حيث يمكن إدخال أنواع مختلفة من تعديلات الفوسفات (فوسفات/فوسفوروثيوات/فوسفورميدات) إلى نفس الأوليغونوكليوتايد لتعديل خصائصه.',
5 => 'في أغلب الأحيان، تكون وحدات بناء الفوسفونات الهيدروجينية محمية عند مجموعة 5'-هيدروكسي وعند المجموعة الأمينية للقواعد النووية A وC وG بنفس الطريقة التي تتم بها حماية وحدات بناء الفوسفونيت (انظر أدناه). ومع ذلك، فإن الحماية في المجموعة الأمينية ليست إلزامية.',
6 => '=== تخليق الفوسفوديستر ===',
7 => '[[ملف:Phosphodiester_method.png|تصغير|300x300بك|مخطط. 3 اقتران الأوليغونوكليوتايد بطريقة فوسفوديستر. Tr = -CPh <sub>3</sub>]]',
8 => 'في الخمسينيات من القرن العشرين، طور [[هار غوبند خورانا]] وزملاؤه طريقة [[رابطة فوسفات ثنائي الأستر|فوسفوديستر]] حيث تم تنشيط 3'- ''O'' -أسيتيل نوكليوسيد-5'- ''O'' -فوسفات '''2''' (المخطط 3) مع ''ن'' ، ن ''{{'}}'' -ثنائي سيكلوهيكسيل كاربوديميد (DCC) أو 4-تولوين سلفونيل. كلوريد (Ts-Cl). عند إزالة مجموعة 3'- ''O'' -الأسيتيل باستخدام التحلل المائي المحفز بالقاعدة، نتج المزيد من استطالة السلسلة. باتباع هذه المنهجية، تم تصنيع مجموعات من النوكليوتيدات ثلاثية ورباعية الأكسجين وتم تحويلها إنزيميًا إلى أوليغونوكليوتايدات أطول، مما سمح بتوضيح [[شيفرة جينية|الشفرة الوراثية]] . يتمثل القيد الرئيسي لطريقة الفوسفوديستر في تكوين أوليجومرات بيروفسفات وأوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات إنترنوكليوسيديك. تبدو هذه الطريقة بمثابة خطوة إلى الوراء من الكيمياء الأكثر انتقائية الموصوفة سابقًا؛ ومع ذلك، في ذلك الوقت، لم تكن معظم مجموعات حماية الفوسفات المتاحة الآن قد تم تقديمها بعد. استلزم الافتقار إلى استراتيجية الحماية الملائمة التراجع إلى كيمياء أبطأ وأقل انتقائية لتحقيق الهدف النهائي للدراسة.',
9 => '=== تخليق الفوسفوتريستر ===',
10 => '[[ملف:Phosphotriester_method.png|تصغير|300x300بك|المخطط 4. اقتران قليل النوكليوتيد بطريقة الفوسفوتريستر؛ MMT = -CPh <sub>2</sub> (4 <sub>-</sub> <sub>MeOC6H4</sub> ).]]',
11 => 'في ستينيات القرن العشرين، طورت مجموعات بقيادة آر. ليتسينغر <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. XIII. Synthesis of oligothymidylates via phosphotriester intermediates|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1969|المجلد=91|العدد=12|صفحة=3350|مؤلف2=Ogilvie, K. K.|دوي=10.1021/ja01040a042}}</ref> وسي. ريس <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=The chemical synthesis of oligo- and poly-nucleotides by the phosphotriester approach|صحيفة=Tetrahedron|مؤلف=Reese, C. B.|سنة=1978|المجلد=34|العدد=21|صفحة=3143|دوي=10.1016/0040-4020(78)87013-6}}</ref> طريقة تحليل الفوسفوتستر. كان الاختلاف المحدد عن نهج ثنائي إستر الفوسفود هو حماية شحنة الفوسفات في كتلة البناء '''1''' (المخطط 4) وفي المنتج '''3''' مع مجموعة [[مجموعة حماية|2-سيانو إيثيل]] . هذا يمنع تكوين أوليغونوكليوتايدات متفرعة في الفوسفات بين النووي. سمحت الانتقائية العالية للطريقة باستخدام عوامل اقتران ومحفزات أكثر كفاءة، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Rapid synthesis of long-chain deoxyribooligonucleotides by the N-methylimidazolide phosphotriester method|صحيفة=Nucleic Acids Res.|مؤلف=Efimov, V. A.|سنة=1983|المجلد=11|العدد=23|صفحات=8369–8387|مؤلف2=Buryakova, A. A.|مؤلف3=Reverdatto, S. V.|مؤلف4=Chakhmakhcheva, O. G.|مؤلف5=Ovchinnikov, Yu. A.|ببمد_سنترال=326588|pmid=6324083|دوي=10.1093/nar/11.23.8369}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Approach to the synthesis of natural and modified oligonucleotides by the phosphotriester method using O-nucleophilic intramolecular catalysis|صحيفة=Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids|مؤلف=Efimov, V. A|سنة=2007|المجلد=26|العدد=8–9|صفحات=1087–93|مؤلف2=Molchanova, N. S.|مؤلف3=Chakhmakhcheva, O. G.|s2cid=34548367|pmid=18058542|دوي=10.1080/15257770701516268}}</ref> مما أدى إلى تقليل طول عملية التوليف بشكل كبير. تم أيضًا تطبيق الطريقة، التي تم تطويرها في البداية لتخليق مرحلة المحلول، على البوليسترين "الفشار" منخفض الارتباط، <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Stepwise synthesis of oligodeoxyribonucleotides on an insoluble polymer support|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Letsinger, R. L.|سنة=1966|المجلد=88|العدد=22|صفحات=5319–24|مؤلف2=Mahadevan|الأول2=V.|pmid=5979268|دوي=10.1021/ja00974a053}}</ref> وبعد ذلك على الزجاج المسامي المتحكم فيه (CPG، راجع "مواد الدعم الصلبة" أدناه)، مما أدى إلى بدء عملية بحث ضخمة في تخليق المرحلة الصلبة من الأوليغونوكليوتايدات وأدى في النهاية إلى أتمتة تجميع سلسلة أوليغونوكليوتايد.',
12 => '=== تخليق ترايستر الفوسفيت ===',
13 => 'في السبعينيات، تم استخدام مشتقات النيوكليوسيدات P(III) الأكثر تفاعلية، 3'- ''O-'' كلوروفوسفيت، بنجاح لتكوين روابط بين النيوكليوسيدات. وأدى ذلك إلى اكتشاف منهجية [[إستر الفوسفيت|تريستر الفوسفيت]] . استفادت المجموعة التي يقودها م. كاروثرز من 1 رباعي الفوسفات الهيدروجيني الأقل عدوانية والأكثر انتقائية ونفذت الطريقة على الطور الصلب. وبعد فترة وجيزة جدًا، قام العمال من نفس المجموعة بتحسين الطريقة باستخدام فوسفوراميديت النيوكليوزيد الأكثر استقرارًا كوحدات بناء. أدى استخدام مجموعة 2-سيانو إيثيل الفوسفيت المحمية بدلاً من مجموعة [[مجموعة حماية|ميثيل]] الأقل سهولة في الاستخدام <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Nucleotide chemistry. X. An investigation of several deoxynucleoside phosphoramidites useful for synthesizing deoxyoligonucleotides|صحيفة=Tetrahedron Lett.|مؤلف=McBride, L. J.|سنة=1983|المجلد=24|العدد=3|صفحات=245–248|مؤلف2=Caruthers, M. H.|دوي=10.1016/S0040-4039(00)81376-3}}</ref> <ref>{{استشهاد بدورية محكمة|عنوان=Hindered dialkylamino nucleoside phosphite reagents in the synthesis of two DNA 51-mers|صحيفة=J. Am. Chem. Soc.|مؤلف=Adams, S. P.|سنة=1983|المجلد=105|العدد=3|صفحات=661–663|مؤلف2=Kavka, K. S.|مؤلف3=Wykes, E. J.|مؤلف4=Holder, S. B.|مؤلف5=Galluppi, G. R.|دوي=10.1021/ja00341a078}}</ref> إلى ظهور فوسفوراميديت النيوكليوزيد المستخدم حاليًا في تخليق الأوليغونوكليوتايد (انظر وحدات بناء الفوسفوراميديت أدناه). العديد من التحسينات اللاحقة على تصنيع كتل البناء، ومركبات اوليغونوكليوتايدات، والبروتوكولات الاصطناعية جعلت من كيمياء الفوسفوراميديت طريقة موثوقة للغاية ومناسبة للاختيار لتحضير الأوليغونوكليوتايدات الاصطناعية.'
] |
نص الصفحة الجديد، مجردا من أية تهيئة (new_text) | 'تخليق الأوليغونوكليوتايد هو التخليق الكيميائي لأجزاء قصيرة نسبيًا من الأحماض النووية ذات التركيب الكيميائي المحدد ( التسلسل ). هذه التقنية مفيدة للغاية في الممارسة المعملية الحالية لأنها توفر وصولاً سريعًا وغير مكلف إلى أليغنوكليوتيدات مصنوعة خصيصًا بالتسلسل المطلوب. في حين أن الإنزيمات تقوم بتصنيع DNA وRNA فقط في اتجاه 5' إلى 3' ، فإن تخليق الأوليغونوكليوتايد الكيميائي ليس له هذا القيد، على الرغم من أنه يتم في أغلب الأحيان في الاتجاه المعاكس، 3' إلى 5'. حاليًا، يتم تنفيذ العملية كتوليف في الطور الصلب بطريقة الفوسفورميديت وكتل بناء الفوسفورميديت المشتقة من 2'-ديوكسينوكليوسيدات المحمية ( dA ، dC ، dG ، و T )، أو الريبونوكليوسيدات ( A ، C ، G ، و U )، أو كيميائيًا النيوكليوسيدات المعدلة، على سبيل المثال LNA أو BNA .
للحصول على الأوليغونوكليوتايد المطلوب، يتم ربط وحدات البناء بشكل تسلسلي بسلسلة الأوليغونوكليوتايد المتنامية بالترتيب الذي يتطلبه تسلسل المنتج (انظر الدورة التركيبية أدناه). تمت أتمتة العملية بالكامل منذ أواخر السبعينيات. عند الانتهاء من تجميع السلسلة، يتم تحرير المنتج من المرحلة الصلبة إلى المحلول، وإزالة الحماية منه، وتجميعه. يؤدي حدوث التفاعلات الجانبية إلى تحديد الحدود العملية لطول الأوليغونوكليوتايدات الإصطناعية (تصل إلى حوالي 200 من بقايا النيوكليوتايدات ) لأن عدد الأخطاء يتراكم مع طول الأوليغونوكليوتايدات التي يتم تصنيعها. غالبًا ما يتم عزل المنتجات بواسطة تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء (HPLC) للحصول على أوليغونوكليوتايدات مرغوبة بدرجة نقاء عالية. عادةً ما تكون الأوليغونوكليوتايدات الأصطناعية عبارة عن جزيئات DNA أو RNA مفردة الجديلة يبلغ طولها حوالي 15-25 قاعدة.
تجد الأوليغونوكليوتايدات مجموعة متنوعة من التطبيقات في البيولوجيا الجزيئية والطب. يتم استخدامها بشكل شائع كأوليغونوكليوتايدات مضادة للاتجاه ، وحمض نووي ريبي متداخل صغير ، ومبادئ تمهيدية لتسلسل الحمض النووي وتضخيمه ، وتحريات للكشف عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي التكميلي عبر التهجين الجزيئي، وأدوات لإدخال الطفرات ومواقع التقييد المستهدفة، ولتخليق الجينات الاصطناعية . أحد التطبيقات الناشئة لتخليق الأوليغونوكليوتايد هو إعادة إنشاء الفيروسات من التسلسل وحده - إما غير ضارة، مثل Phi_X_174 ، أو خطيرة مثل فيروس الأنفلونزا 1917 أو SARS-CoV-2 .
التاريخ
عدل
شهد تطور تخليق الأوليغونوكليوتايد أربع طرق رئيسية لتشكيل الروابط بين النيوكليوسيديات وتمت مراجعتها في الأدبيات بتفصيل كبير.
تخليق الفوسفونات H: طورت هذه الطريقة مجموعة ألكسندر تود في أوائل الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفونات H ثنائية الإستر في محلول، تليها أكسدة وإزالة الحماية.
تخليق الفوسفات ثلاثي الإستر: طورت هذه الطريقة أيضًا مجموعة تود في الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفات ثلاثي الإستر، والتي هي أكثر استقرارًا من الفوسفونات H، ولكنها تتطلب ظروفًا أكثر قسوة وحماية أكثر.
تخليق الفوسفيت ثلاثي الإستر: عرضت هذه الطريقة مارفن كاروثرز وزملاؤه في أواخر السبعينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفيت ثلاثي الإستر على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة أسرع وأكثر كفاءة ومرونة من الطرق السابقة، وهي أساس معظم تخليق الأوليغونوكليوتيدات الحديث.
تخليق الفوسفوراميديت: طورت هذه الطريقة ويلي بانوارث وزملاؤه في منتصف الثمانينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفوراميديت، والتي هي أكثر تفاعلاً وأقل سمية من الفوسفيت ثلاثي الإستر، على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة هي الطريقة الأكثر استخدامًا لتخليق الأوليغونوكليوتيدات اليوم، حيث تسمح بإدخال تعديلات وعلامات مختلفة.[1]
مراجع
عدل
.mw-parser-output .reflist{font-size:90%;margin-bottom:0.5em;list-style-type:decimal;overflow-y:auto;max-height:300px}.mw-parser-output .reflist .references{font-size:100%;margin-bottom:0;list-style-type:inherit}.mw-parser-output .reflist-columns-2{column-width:30em}.mw-parser-output .reflist-columns-3{column-width:25em}.mw-parser-output .reflist-columns{margin-top:0.3em}.mw-parser-output .reflist-columns ol{margin-top:0}.mw-parser-output .reflist-columns li{page-break-inside:avoid;break-inside:avoid-column}.mw-parser-output .reflist-upper-alpha{list-style-type:upper-alpha}.mw-parser-output .reflist-upper-roman{list-style-type:upper-roman}.mw-parser-output .reflist-lower-alpha{list-style-type:lower-alpha}.mw-parser-output .reflist-lower-greek{list-style-type:lower-greek}.mw-parser-output .reflist-lower-roman{list-style-type:lower-roman}@media print{.mw-parser-output .reflist{overflow-y:visible!important;max-height:none!important}}
^ .mw-parser-output cite.citation{font-style:inherit;word-wrap:break-word}.mw-parser-output .citation q{quotes:"\"""\"""'""'"}.mw-parser-output .citation:target{background-color:rgba(0,127,255,0.133)}.mw-parser-output .id-lock-free a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-free a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Lock-green.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .id-lock-limited a,.mw-parser-output .id-lock-registration a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-limited a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-registration a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .id-lock-subscription a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-subscription a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/aa/Lock-red-alt-2.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .cs1-ws-icon a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4c/Wikisource-logo.svg")left 0.1em center/12px no-repeat}.mw-parser-output .cs1-code{color:inherit;background:inherit;border:none;padding:inherit}.mw-parser-output .cs1-hidden-error{display:none;color:#d33}.mw-parser-output .cs1-visible-error{color:#d33}.mw-parser-output .cs1-maint{display:none;color:#3a3;margin-left:0.3em}.mw-parser-output .cs1-format{font-size:95%}.mw-parser-output .cs1-kern-left{padding-left:0.2em}.mw-parser-output .cs1-kern-right{padding-right:0.2em}.mw-parser-output .citation .mw-selflink{font-weight:inherit}https://www.biosyn.com/. "The Chemical Synthesis of Oligonucleotides". www.biosyn.com. اطلع عليه بتاريخ 2024-01-16. {{استشهاد ويب}}: روابط خارجية في |مؤلف= (مساعدة)
بوابة الكيمياء' |
مصدر HTML المعروض للمراجعة الجديدة (new_html) | '<div class="mw-content-rtl mw-parser-output" lang="ar" dir="rtl"><p><b>تخليق الأوليغونوكليوتايد</b> هو التخليق الكيميائي لأجزاء قصيرة نسبيًا من <a href="/wiki/%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A" title="حمض نووي">الأحماض النووية</a> ذات التركيب الكيميائي المحدد ( <a href="/wiki/%D8%AA%D8%B3%D9%84%D8%B3%D9%84_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A" title="تسلسل الحمض النووي">التسلسل</a> ). هذه التقنية مفيدة للغاية في الممارسة المعملية الحالية لأنها توفر وصولاً سريعًا وغير مكلف إلى <a href="/wiki/%D9%82%D9%84%D9%8A%D9%84_%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%AA%D9%8A%D8%AF" title="قليل النوكليوتيد">أليغنوكليوتيدات</a> مصنوعة خصيصًا بالتسلسل المطلوب. في حين أن <a href="/wiki/%D8%A5%D9%86%D8%B2%D9%8A%D9%85" title="إنزيم">الإنزيمات</a> تقوم بتصنيع <a href="/wiki/%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A_%D8%B1%D9%8A%D8%A8%D9%88%D8%B2%D9%8A_%D9%85%D9%86%D9%82%D9%88%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%83%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="حمض نووي ريبوزي منقوص الأكسجين">DNA</a> <a href="/wiki/%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A_%D8%B1%D9%8A%D8%A8%D9%88%D8%B2%D9%8A" title="حمض نووي ريبوزي">وRNA</a> فقط في <a href="/wiki/%D8%A7%D9%84%D8%A7%D8%AA%D8%AC%D8%A7%D9%87%D9%8A%D8%A9_(%D8%B9%D9%84%D9%85_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D8%AD%D9%8A%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%AC%D8%B2%D9%8A%D8%A6%D9%8A)" title="الاتجاهية (علم الأحياء الجزيئي)">اتجاه 5' إلى 3'</a> ، فإن تخليق الأوليغونوكليوتايد الكيميائي ليس له هذا القيد، على الرغم من أنه يتم في أغلب الأحيان في الاتجاه المعاكس، 3' إلى 5'. حاليًا، يتم تنفيذ العملية كتوليف في الطور الصلب بطريقة الفوسفورميديت وكتل بناء الفوسفورميديت المشتقة من <a href="/wiki/%D9%86%D9%8A%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%B3%D9%8A%D8%AF" title="نيوكليوسيد">2'-ديوكسينوكليوسيدات</a> المحمية ( <a href="/wiki/%D8%A3%D8%AF%D9%8A%D9%86%D9%88%D8%B3%D9%8A%D9%86_%D9%85%D9%86%D9%82%D9%88%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%83%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="أدينوسين منقوص الأكسجين">dA</a> ، <a href="/wiki/%D8%B3%D9%8A%D8%AA%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D9%86_%D9%85%D9%86%D9%82%D9%88%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%83%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="سيتيدين منقوص الأكسجين">dC</a> ، <a href="/wiki/%D8%BA%D9%88%D8%A7%D9%86%D9%88%D8%B3%D9%8A%D9%86_%D9%85%D9%86%D9%82%D9%88%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%83%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="غوانوسين منقوص الأكسجين">dG</a> ، و <a href="/wiki/%D8%AB%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D9%86" title="ثيميدين">T</a> )، أو <a href="/wiki/%D9%86%D9%8A%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%B3%D9%8A%D8%AF" title="نيوكليوسيد">الريبونوكليوسيدات</a> ( <a href="/wiki/%D8%A3%D8%AF%D9%8A%D9%86%D9%88%D8%B2%D9%8A%D9%86" title="أدينوزين">A</a> ، <a href="/wiki/%D8%B3%D9%8A%D8%AA%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D9%86" title="سيتيدين">C</a> ، <a href="/wiki/%D8%BA%D9%88%D8%A7%D9%86%D9%88%D8%B2%D9%8A%D9%86" title="غوانوزين">G</a> ، و <a href="/wiki/%D9%8A%D9%88%D8%B1%D9%8A%D8%AF%D9%8A%D9%86" title="يوريدين">U</a> )، أو كيميائيًا النيوكليوسيدات المعدلة، على سبيل المثال LNA أو <a href="/wiki/%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A_%D9%85%D8%AC%D8%B3%D9%88%D8%B1" title="حمض نووي مجسور">BNA</a> .
</p><p>للحصول على الأوليغونوكليوتايد المطلوب، يتم ربط وحدات البناء بشكل تسلسلي بسلسلة الأوليغونوكليوتايد المتنامية بالترتيب الذي يتطلبه تسلسل المنتج (انظر الدورة التركيبية أدناه). تمت أتمتة العملية بالكامل منذ أواخر السبعينيات. عند الانتهاء من تجميع السلسلة، يتم تحرير المنتج من المرحلة الصلبة إلى المحلول، وإزالة الحماية منه، وتجميعه. يؤدي حدوث التفاعلات الجانبية إلى تحديد الحدود العملية لطول الأوليغونوكليوتايدات الإصطناعية (تصل إلى حوالي 200 من بقايا <a href="/wiki/%D9%86%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%AA%D9%8A%D8%AF" title="نوكليوتيد">النيوكليوتايدات</a> ) لأن عدد الأخطاء يتراكم مع طول الأوليغونوكليوتايدات التي يتم تصنيعها. غالبًا ما يتم عزل المنتجات بواسطة <a href="/wiki/%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D8%B1%D8%A7%D8%A8_%D8%A7%D9%84%D8%B3%D8%A7%D8%A6%D9%84_%D8%B1%D9%81%D9%8A%D8%B9_%D8%A7%D9%84%D8%A5%D9%86%D8%AC%D8%A7%D8%B2" title="استشراب السائل رفيع الإنجاز">تحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء</a> (HPLC) للحصول على أوليغونوكليوتايدات مرغوبة بدرجة نقاء عالية. عادةً ما تكون الأوليغونوكليوتايدات الأصطناعية عبارة عن جزيئات DNA أو RNA مفردة الجديلة يبلغ طولها حوالي 15-25 قاعدة.
</p><p>تجد الأوليغونوكليوتايدات مجموعة متنوعة من التطبيقات في البيولوجيا الجزيئية والطب. يتم استخدامها بشكل شائع كأوليغونوكليوتايدات <a href="/wiki/%D8%A7%D8%AA%D8%AC%D8%A7%D9%87_(%D8%A8%D9%8A%D9%88%D9%84%D9%88%D8%AC%D9%8A%D8%A7_%D8%AC%D8%B2%D9%8A%D8%A6%D9%8A%D8%A9)" title="اتجاه (بيولوجيا جزيئية)">مضادة للاتجاه</a> ، <a href="/wiki/%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A_%D8%B1%D9%8A%D8%A8%D9%88%D8%B2%D9%8A_%D9%85%D8%AA%D8%AF%D8%A7%D8%AE%D9%84_%D8%B5%D8%BA%D9%8A%D8%B1" title="حمض نووي ريبوزي متداخل صغير">وحمض نووي ريبي متداخل صغير</a> ، <a href="/wiki/%D9%85%D8%B4%D8%B1%D8%B9_(%D8%A3%D8%AD%D9%8A%D8%A7%D8%A1)" title="مشرع (أحياء)">ومبادئ تمهيدية</a> <a href="/wiki/%D8%AA%D8%B3%D9%84%D8%B3%D9%84_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D9%85%D8%B6_%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%88%D9%88%D9%8A_%D8%A7%D9%84%D8%B1%D9%8A%D8%A8%D9%88%D8%B2%D9%8A_%D9%85%D9%86%D9%82%D9%88%D8%B5_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%83%D8%B3%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="تسلسل الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين">لتسلسل الحمض النووي</a> <a href="/wiki/%D8%AA%D9%81%D8%A7%D8%B9%D9%84_%D8%A7%D9%84%D8%A8%D9%88%D9%84%D9%8A%D9%85%D8%B1%D8%A7%D8%B2_%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%AA%D8%B3%D9%84%D8%B3%D9%84" title="تفاعل البوليمراز المتسلسل">وتضخيمه</a> ، <a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A8%D8%A7%D8%B1_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%87%D8%AC%D9%8A%D9%86" title="مسبار التهجين">وتحريات</a> للكشف عن الحمض النووي أو الحمض النووي الريبوزي التكميلي عبر التهجين الجزيئي، وأدوات لإدخال <a href="/wiki/%D8%B7%D9%81%D8%B1%D8%A9_(%D8%A3%D8%AD%D9%8A%D8%A7%D8%A1)" title="طفرة (أحياء)">الطفرات</a> ومواقع التقييد المستهدفة، <a href="/wiki/%D8%AA%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%82_%D8%A7%D8%B5%D8%B7%D9%86%D8%A7%D8%B9%D9%8A_%D9%84%D9%84%D8%AC%D9%8A%D9%86%D8%A7%D8%AA" title="تخليق اصطناعي للجينات">ولتخليق الجينات الاصطناعية</a> . أحد التطبيقات الناشئة لتخليق الأوليغونوكليوتايد هو إعادة إنشاء الفيروسات من التسلسل وحده - إما غير ضارة، مثل Phi_X_174 ، أو خطيرة مثل فيروس <a href="/wiki/%D8%A5%D9%86%D9%81%D9%84%D9%88%D9%86%D8%B2%D8%A7" title="إنفلونزا">الأنفلونزا</a> 1917 أو <a href="/wiki/%D9%81%D9%8A%D8%B1%D9%88%D8%B3_%D9%83%D9%88%D8%B1%D9%88%D9%86%D8%A7_%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%B1%D8%AA%D8%A8%D8%B7_%D8%A8%D8%A7%D9%84%D9%85%D8%AA%D9%84%D8%A7%D8%B2%D9%85%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%AA%D9%86%D9%81%D8%B3%D9%8A%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%AD%D8%A7%D8%AF%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D8%B4%D8%AF%D9%8A%D8%AF%D8%A9_%D8%A7%D9%84%D9%86%D9%88%D8%B9_2" title="فيروس كورونا المرتبط بالمتلازمة التنفسية الحادة الشديدة النوع 2">SARS-CoV-2</a> .
</p>
<h2><span id=".D8.A7.D9.84.D8.AA.D8.A7.D8.B1.D9.8A.D8.AE"></span><span class="mw-headline" id="التاريخ">التاريخ</span><span class="mw-editsection">
<a role="button"
href="/w/index.php?title=%D8%AA%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%82_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%88%D9%84%D9%8A%D8%BA%D9%88%D9%86%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%AA%D8%A7%D9%8A%D8%AF&action=edit&section=1"title="عدل القسم: التاريخ"
class="cdx-button cdx-button--size-large cdx-button--fake-button cdx-button--fake-button--enabled cdx-button--icon-only cdx-button--weight-quiet ">
<span
class="minerva-icon minerva-icon--edit"></span>
<span>عدل</span>
</a>
</span>
</h2>
<p>شهد تطور تخليق الأوليغونوكليوتايد أربع طرق رئيسية لتشكيل الروابط بين النيوكليوسيديات وتمت مراجعتها في الأدبيات بتفصيل كبير.
</p><p><br />
تخليق الفوسفونات H: طورت هذه الطريقة مجموعة ألكسندر تود في أوائل الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفونات H ثنائية الإستر في محلول، تليها أكسدة وإزالة الحماية.
</p><p>تخليق الفوسفات ثلاثي الإستر: طورت هذه الطريقة أيضًا مجموعة تود في الخمسينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفات ثلاثي الإستر، والتي هي أكثر استقرارًا من الفوسفونات H، ولكنها تتطلب ظروفًا أكثر قسوة وحماية أكثر.
</p><p>تخليق الفوسفيت ثلاثي الإستر: عرضت هذه الطريقة مارفن كاروثرز وزملاؤه في أواخر السبعينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفيت ثلاثي الإستر على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة أسرع وأكثر كفاءة ومرونة من الطرق السابقة، وهي أساس معظم تخليق الأوليغونوكليوتيدات الحديث.
</p><p>تخليق الفوسفوراميديت: طورت هذه الطريقة ويلي بانوارث وزملاؤه في منتصف الثمانينيات. تتضمن ربط النيوكليوسيدات بالفوسفوراميديت، والتي هي أكثر تفاعلاً وأقل سمية من الفوسفيت ثلاثي الإستر، على دعم صلب، تليها أكسدة وإزالة الحماية. هذه الطريقة هي الطريقة الأكثر استخدامًا لتخليق الأوليغونوكليوتيدات اليوم، حيث تسمح بإدخال تعديلات وعلامات مختلفة.<sup id="cite_ref-1" class="reference"><a href="#cite_note-1">[1]</a></sup>
</p>
<h2><span id=".D9.85.D8.B1.D8.A7.D8.AC.D8.B9"></span><span class="mw-headline" id="مراجع">مراجع</span><span class="mw-editsection">
<a role="button"
href="/w/index.php?title=%D8%AA%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%82_%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%88%D9%84%D9%8A%D8%BA%D9%88%D9%86%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%AA%D8%A7%D9%8A%D8%AF&action=edit&section=2"title="عدل القسم: مراجع"
class="cdx-button cdx-button--size-large cdx-button--fake-button cdx-button--fake-button--enabled cdx-button--icon-only cdx-button--weight-quiet ">
<span
class="minerva-icon minerva-icon--edit"></span>
<span>عدل</span>
</a>
</span>
</h2>
<style data-mw-deduplicate="TemplateStyles:r64185426">.mw-parser-output .reflist{font-size:90%;margin-bottom:0.5em;list-style-type:decimal;overflow-y:auto;max-height:300px}.mw-parser-output .reflist .references{font-size:100%;margin-bottom:0;list-style-type:inherit}.mw-parser-output .reflist-columns-2{column-width:30em}.mw-parser-output .reflist-columns-3{column-width:25em}.mw-parser-output .reflist-columns{margin-top:0.3em}.mw-parser-output .reflist-columns ol{margin-top:0}.mw-parser-output .reflist-columns li{page-break-inside:avoid;break-inside:avoid-column}.mw-parser-output .reflist-upper-alpha{list-style-type:upper-alpha}.mw-parser-output .reflist-upper-roman{list-style-type:upper-roman}.mw-parser-output .reflist-lower-alpha{list-style-type:lower-alpha}.mw-parser-output .reflist-lower-greek{list-style-type:lower-greek}.mw-parser-output .reflist-lower-roman{list-style-type:lower-roman}@media print{.mw-parser-output .reflist{overflow-y:visible!important;max-height:none!important}}</style><div class="reflist">
<div class="mw-references-wrap"><ol class="references">
<li id="cite_note-1"><span class="mw-cite-backlink"><b><a href="#cite_ref-1">^</a></b></span> <span class="reference-text"><style data-mw-deduplicate="TemplateStyles:r63510230">.mw-parser-output cite.citation{font-style:inherit;word-wrap:break-word}.mw-parser-output .citation q{quotes:"\"""\"""'""'"}.mw-parser-output .citation:target{background-color:rgba(0,127,255,0.133)}.mw-parser-output .id-lock-free a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-free a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/6/65/Lock-green.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .id-lock-limited a,.mw-parser-output .id-lock-registration a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-limited a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-registration a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/d6/Lock-gray-alt-2.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .id-lock-subscription a,.mw-parser-output .citation .cs1-lock-subscription a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/aa/Lock-red-alt-2.svg")left 0.1em center/9px no-repeat}.mw-parser-output .cs1-ws-icon a{background:url("//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/4/4c/Wikisource-logo.svg")left 0.1em center/12px no-repeat}.mw-parser-output .cs1-code{color:inherit;background:inherit;border:none;padding:inherit}.mw-parser-output .cs1-hidden-error{display:none;color:#d33}.mw-parser-output .cs1-visible-error{color:#d33}.mw-parser-output .cs1-maint{display:none;color:#3a3;margin-left:0.3em}.mw-parser-output .cs1-format{font-size:95%}.mw-parser-output .cs1-kern-left{padding-left:0.2em}.mw-parser-output .cs1-kern-right{padding-right:0.2em}.mw-parser-output .citation .mw-selflink{font-weight:inherit}</style><cite id="CITEREFhttps://www.biosyn.com/" class="citation web cs1 cs1-prop-no_archive"><a rel="nofollow" class="external free" href="https://www.biosyn.com/">https://www.biosyn.com/</a>. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.biosyn.com/tew/the-chemical-synthesis-of-oligonucleotides.aspx">"The Chemical Synthesis of Oligonucleotides"</a>. <i>www.biosyn.com</i><span class="reference-accessdate">. اطلع عليه بتاريخ <span class="nowrap">2024-01-16</span></span>.</cite><span title="ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info%3Aofi%2Ffmt%3Akev%3Amtx%3Ajournal&rft.genre=unknown&rft.jtitle=www.biosyn.com&rft.atitle=The+Chemical+Synthesis+of+Oligonucleotides&rft.au=https%3A%2F%2Fwww.biosyn.com%2F&rft_id=https%3A%2F%2Fwww.biosyn.com%2Ftew%2Fthe-chemical-synthesis-of-oligonucleotides.aspx&rfr_id=info%3Asid%2Far.wikipedia.org%3A%D8%AA%D8%AE%D9%84%D9%8A%D9%82+%D8%A7%D9%84%D8%A3%D9%88%D9%84%D9%8A%D8%BA%D9%88%D9%86%D9%88%D9%83%D9%84%D9%8A%D9%88%D8%AA%D8%A7%D9%8A%D8%AF" class="Z3988"></span> <span class="cs1-visible-error citation-comment"><code class="cs1-code">{{<a href="/wiki/%D9%82%D8%A7%D9%84%D8%A8:%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D9%87%D8%A7%D8%AF_%D9%88%D9%8A%D8%A8" title="قالب:استشهاد ويب">استشهاد ويب</a>}}</code>: </span><span class="cs1-visible-error citation-comment">روابط خارجية في <code class="cs1-code"><code class="cs1-code">|مؤلف=</code></code> (<a href="/wiki/%D9%85%D8%B3%D8%A7%D8%B9%D8%AF%D8%A9:%D8%A3%D8%AE%D8%B7%D8%A7%D8%A1_%D8%A7%D9%84%D8%A7%D8%B3%D8%AA%D8%B4%D9%87%D8%A7%D8%AF#param_has_ext_link" title="مساعدة:أخطاء الاستشهاد">مساعدة</a>)</span></span>
</li>
</ol></div></div>
<ul class="bandeau-portail إعلام" id="bandeau-portail">
<li class="bandeau-portail-element"><span class="bandeau-portail-icone" style="margin-right:1em"><span class="noviewer" typeof="mw:File"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1" title="بوابة:الكيمياء"><img alt="أيقونة بوابة" src="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/28px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png" decoding="async" width="28" height="28" class="mw-file-element" srcset="//upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/42px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png 1.5x, //upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/5/59/Nuvola_apps_edu_science.svg/56px-Nuvola_apps_edu_science.svg.png 2x" data-file-width="128" data-file-height="128" /></a></span></span><span class="bandeau-portail-texte"><a href="/wiki/%D8%A8%D9%88%D8%A7%D8%A8%D8%A9:%D8%A7%D9%84%D9%83%D9%8A%D9%85%D9%8A%D8%A7%D8%A1" title="بوابة:الكيمياء">بوابة الكيمياء</a></span></li></ul></div>' |
ما إذا كان التعديل قد تم عمله من خلال عقدة خروج تور (tor_exit_node) | false |
طابع زمن التغيير ليونكس (timestamp) | '1705449327' |
اسم قاعدة البيانات للويكي (wiki_name) | 'arwiki' |
